Анализ кала: комбинированный метод (седиментация и флотация) в растворе сульфата цинка или в растворе из хлорида цинка и поваренной соли

При этом методе исследования разные стадии паразитов седиментируют сначала в воде, а затем флотируют за счет своего низкого специфического веса в растворах солей с высоким специфическим весом.

Преимущества комбинированного метода заключается в более высоком шансе определить паразитов, благодаря большому количеству использованной пробы стула (до 20 г).
Для точного анализа необходимо собрать минимум 4-5 г кала каждый день в течение трех дней подряд.

Необходимый материал:
• 5 — 20 г кала
• ступка и пест
• кофейное сито/фильтр
• стакан (250 мл)
• промывалка
• проволочный глазок (согнутый прямоугольно примерно 6 мм)
• центрифужные пробирки (15 мл)
• центрифуга
• предметное стекло
• покровные стекла
• микроскоп
•раствор для флотации
• ареометр

Инструкции:
1. Поместить пробу кала в сито. Если понадобится, до этого смешать с водой в ступке. Раствор кала с водой вылить через сито в стакан при помощи сильной струи воды из промывалки. Размачивать кал до тех пор, пока стакан не наполнится.
2. Дать минимум 30 минут отстояться (но не дольше 1,5 часа).
3. Резко слить лишнюю воду, пока не останется около 1 мл, максимально 2 мл седимента.
4. Теперь флотация: весь седимент вылить в центрифужные пробирки и залить раствором для флотации.

Центрифугировать пробирки 3-5 минут при 300 x g (в зависимости от центрифуги соответствует 1000-1500 оборотам в минуту).

Чтобы после центрифугации анализировать паразитов, плавающих на поверхности пробы в пробирке, существует несколько возможностей:

• накрыть до краев наполненную пробой центрифужную пробирку покровным стеклом и центрифугировать так, чтобы проба касалась покровного стекла. Центрифугация с покровным стеклом лучше всего получается с использованием сахарного раствора.

• покрыть пробирку с пробой после центрифугации. Для этого пробирка должна быть заполнена полностью до мениска на поверхности, накрыть покровным стеклом пробирку и выждать еще несколько минут флотацию.
Затем стекло нужно снять, положить на предметное стекло и анализировать под микроскопом.

Как альтернативу можно использовать сам раствор кала, несколько капель которого можно при помощи проволочного глазка нанести на предметное стекло и микроскопировать.

Микроскопическое исследование:
Анализируется вся поверхность под покровным стеклом. Для начала при слабом увеличении (например, окуляр 8-10х, объектив 4-6х). После повысить увеличение (окуляр 8-10х, объектив 10-16х).

Таким методом можно точно определить:
Яйца гельминтов и большинство ооцист, а также цист простейших. Яйца гельминтов могут отмирать после долгого пребывания в растворе для флотации.
Не совсем надежно определение личинок нематод, трематод (деформируются). Совершенно невозможно определить трофозоитов простейших и цисты амеб.

Раствор для флотации

Количество

Объем воды

Специфический вес (плотность)

 

Насыщенный раствор поваренной соли

(NaCl)

340 г

1000 мл

 

примерно 1,2

 

Хлорид цинка –поваренная соль (ZnCl2 + NaCl)

275 г ZnCl2

262 г NaCl

 

1000 мл

 

1,3

 

Раствор сульфата цинка (ZnSO4)

 

760 г ZnSO4

 

1000 мл

 

1,3

 

Сахарный раствор

 

550 г сахара

7 мл формалина (37%), для препятствия размножения бактерий и грибков

 

440 мл

 

1,3

 

Источник: European scientific counsel companion animal parasites
http://www.dgk-dvg.de/download/ESCCAP_Diagnostik_Leitfaden_Helminthen_28-05-2008.pdf

Добавить комментарий

Заполните поля или щелкните по значку, чтобы оставить свой комментарий:

Логотип WordPress.com

Для комментария используется ваша учётная запись WordPress.com. Выход / Изменить )

Фотография Twitter

Для комментария используется ваша учётная запись Twitter. Выход / Изменить )

Фотография Facebook

Для комментария используется ваша учётная запись Facebook. Выход / Изменить )

Google+ photo

Для комментария используется ваша учётная запись Google+. Выход / Изменить )

Connecting to %s